Detalhes da Oferta

A disciplina abordará os principais métodos moleculares e imunológicos aplicados à saúde, com ênfase em seus princípios, possibilidades de uso, limitações e interpretação de resultados.
Serão discutidas técnicas clássicas e atuais empregadas na análise de DNA, RNA, proteínas, antígenos, anticorpos e células, incluindo Southern blotting, hibridização in situ, FISH, RFLP, PCR, RT-PCR, PCR multiplex, PCR em tempo real, PFGE, microarranjos, sequenciamento Sanger, sequenciamento de nova geração, metagenômica, proteômica, espectrometria de massas, citometria de fluxo, ELISA, ELISpot, Western blotting, imunofluorescência, imunocromatografia e testes rápidos.
Serão apresentados exemplos de aplicação em doenças infecciosas, doenças genéticas, câncer, hematologia, vigilância epidemiológica, imunomonitoramento, identificação de patógenos, avaliação de resposta imune, medicina forense e desenvolvimento de produtos biotecnológicos em saúde.

Objetivo geral

Apresentar uma visão integrada das principais tecnologias moleculares e imunológicas utilizadas em saúde, capacitando o discente a compreender os fundamentos, aplicações, limitações e critérios de escolha dessas metodologias em diferentes contextos de pesquisa, diagnóstico, vigilância e desenvolvimento biotecnológico.

Objetivos específicos

i) Compreender os princípios básicos das técnicas moleculares e imunológicas aplicadas à saúde;
ii) Diferenciar métodos baseados em ácidos nucleicos, proteínas, antígenos, anticorpos e células;
iii) Relacionar as metodologias estudadas a aplicações em doenças infecciosas, genéticas, oncológicas, hematológicas, imunológicas e forenses;
iv) Interpretar resultados laboratoriais representados por bandas, curvas de amplificação, sinais fluorescentes, perfis celulares, reatividade antígeno-anticorpo e dados de sequenciamento;
v) Discutir vantagens, limitações, controle de qualidade, custo, infraestrutura e aplicabilidade das técnicas em diferentes realidades laboratoriais;
vi) Avaliar criticamente artigos científicos que utilizem métodos moleculares e imunológicos em saúde.
Conteúdo programático

Encontro 1 — Introdução às tecnologias moleculares em saúde e aplicações diagnósticas
Conceito de diagnóstico molecular e biomarcadores.
Aplicações em doenças infecciosas, doenças genéticas, câncer, resistência antimicrobiana, carga viral, paternidade e investigação forense. Vantagens e limitações dos testes moleculares. Tipos de amostras biológicas. Controle de qualidade, contaminação, inibidores e interpretação de resultados.

Encontro 2 — Métodos clássicos baseados em DNA: Southern blotting, hibridização in situ, FISH e RFLP
Princípios de hibridização molecular. Southern blotting e uso de sondas. Hibridização in situ e FISH no diagnóstico citogenético e onco-hematológico. RFLP e PCR-RFLP como marcadores moleculares. Enzimas de restrição, sítios de corte e interpretação de padrões de bandas. Aplicações em doenças genéticas, leucemias, câncer, identificação de espécies, Cannabis forense e testes de vínculo genético.

Encontro 3 — PCR e suas variações
Princípios da reação em cadeia da polimerase. Desnaturação, anelamento, extensão, primers, Taq DNA polimerase, magnésio, dNTPs e controles. PCR convencional, RT-PCR, nested PCR, multiplex PCR, RAPD-PCR e PCR-RFLP.
Aplicações em detecção de patógenos, genotipagem, identificação de mutações, repetições em tandem, fingerprinting, paternidade, doenças infecciosas e estudos de diversidade genética.

Encontro 4 — PCR em tempo real, sequenciamento e abordagens ômicas
PCR em tempo real, SYBR Green, sondas TaqMan, Ct/Cq, curvas de amplificação, curva padrão, eficiência, melting curve e quantificação relativa. Sequenciamento Sanger e sequenciamento de nova geração. Aplicações em diagnóstico, carga viral, expressão gênica, resistência a fármacos, metagenômica clínica, vigilância genômica, microbioma, proteômica, espectrometria de massas e metabolômica. Introdução à análise e interpretação de dados moleculares.

Encontro 5 — Imunoensaios aplicados à saúde: ELISA, ELISpot, Western blotting, imunofluorescência e testes rápidos.
Princípios das interações antígeno-anticorpo. ELISA direto, indireto, sanduíche e competitivo. Aplicações em sorologia, dosagem de citocinas, diagnóstico de infecções e avaliação de resposta vacinal.
ELISpot como método para quantificação de células secretoras de citocinas, com destaque para imunomonitoramento, vacinas e estudos realizados durante a pandemia de COVID-19.
Western blotting, imunofluorescência, imunocromatografia e testes rápidos. Sensibilidade, especificidade, reatividade cruzada, janela imunológica e interpretação de resultados.

Encontro 6 — Citometria de fluxo e integração das plataformas moleculares e imunológicas
Fundamentos da citometria de fluxo.
Dispersão frontal e lateral, fluorocromos, anticorpos monoclonais, compensação, gating e painéis multiparamétricos. Imunofenotipagem em hematologia, contagem de linfócitos T CD4/CD8, avaliação de ativação celular, apoptose, proliferação, citocinas intracelulares e resposta imune. Integração entre citometria, imunoensaios, biologia molecular e ômicas em pesquisa translacional, diagnóstico, vigilância e desenvolvimento tecnológico. Discussão dos seminários finais.

Atividades assíncronas — 6 horas
Leitura dirigida de artigos científicos selecionados;
análise crítica de figuras metodológicas e resultados laboratoriais;
preparação de seminário sobre uma metodologia molecular ou imunológica;
elaboração de síntese escrita relacionando princípio técnico, aplicação, vantagens, limitações e possibilidade de uso em saúde.

Metodologia de ensino
Aulas expositivas dialogadas em ambiente virtual, com apresentação de exemplos aplicados, discussão de artigos científicos, interpretação de resultados laboratoriais, análise de figuras metodológicas e seminários discentes.
A disciplina priorizará a compreensão conceitual das técnicas e sua aplicabilidade em problemas reais de saúde, pesquisa, vigilância e desenvolvimento biotecnológico.

Avaliação

Será pela participação nas discussões e atividades síncronas — 20%
Análise crítica de artigo ou metodologia — 30%
Seminário final sobre técnica molecular ou imunológica aplicada à saúde — 50%

Sugestão de temas para seminários

RFLP e aplicações forenses
FISH em leucemias e tumores sólidos
PCR em tempo real em carga viral e diagnóstico infeccioso
NGS e vigilância genômica
Metagenômica clínica

ELISA e testes sorológicos em doenças infecciosas
ELISpot em vacinas e COVID-19
Citometria de fluxo em imunomonitoramento
Imunocromatografia e testes rápidos
Espectrometria de massas em proteômica ou metabolômica.

Bibliografia básica sugerida

Molecular Diagnostics. Green MR, Sambrook J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual.
Abbas AK, Lichtman AH, Pillai S.
Cellular and Molecular Immunology. Murphy K, Weaver C. Janeway’s Immunobiology.
Ormerod MG.
Flow Cytometry: A Basic Introduction.
Harlow E, Lane D. Antibodies: A Laboratory Manual.

Bibliografia complementar

Artigos científicos selecionados sobre Southern blotting, FISH, RFLP, PCR, qPCR, NGS, metagenômica, ELISA, ELISpot, citometria de fluxo, imunomonitoramento, diagnóstico molecular e vigilância epidemiológica.