Corpo Discente - Egressos
Neriane Monteiro Néry
| Título | PAPEL DAS CÉLULAS DENDRÍTICAS NA REGENERAÇÃO DO MÚSCULO GASTROCNÊMIO EM MODELO DE ENVENENAMENTO EXPERIMENTAL POR Bothrops jararacussu | ||||||||||||||||||||||||
| Data da Defesa | 28/09/2023 | ||||||||||||||||||||||||
| Download | Em sigilo | ||||||||||||||||||||||||
Banca
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| Palavras-Chaves | Miotoxicidade; Citocinas; BMDCs; Imunofenotipagem; Biotecnologia. | ||||||||||||||||||||||||
| Resumo | Os acidentes ofídicos são considerados um grave problema de saúde pública e, por esse motivo, em 2017 a Organização Mundial da Saúde (OMS) classificou-os como uma doença tropical negligenciada. Em sua maioria, as picadas por serpentes venenosas causam alterações locais e sistêmicas no músculo esquelético e, no caso do veneno de Bothrops jararacussu (vBj), o edema e a necrose têm como consequências as disfunções teciduais, e por isso é considerado um dos venenos com maior efeito miotóxico dentre as espécies do gênero Bothrops. Estudos revelam que os leucócitos, principalmente os neutrófilos e macrófagos, desempenham um papel relevante no processo de regeneração tecidual, após envenenamento por serpentes botrópicas. As células dendríticas (DCs) do mesmo modo desempenham funções importantes por serem leucócitos altamente especializados na apresentação de antígenos. Juntamente com os monócitos, macrófagos e células miogênicas foi observado a ativação de DCs na primeira fase da lesão muscular. Desse modo, o presente estudo avaliou o potencial de DCs na regeneração do músculo gastrocnêmio após o envenenamento. Para isso, células da medula óssea de camundongos Swiss foram obtidas e os precursores hematopoiéticos foram estimulados a diferenciar-se em DCs (BMDCs) na presença de GM-CSF e IL-4. O processo de diferenciação foi observado durante 8 dias por meio da expressão das moléculas de superfície MHC-II, CD1d, CD83, CD11c, CD86 e CD80 e, a maturação das BMDCs foi induzida ao final da cultura com a adição do LPS ou do vBj. A expressão desses marcadores e a liberação de IL-6, TNF-α e IL-1β foi observada durante todo o processo de diferenciação, bem como na maturação. No processo de maturação ativado pelo LPS, a expressão de MCH-II aumentou e foram observados níveis moderados de CD83 e CD86. Já a expressão de CD11c e CD80 permaneceu elevada durante toda a diferenciação. Após a incubação com vBj houve uma diminuição da expressão dos marcadores CD1d, CD11c, CD83 e CD86. No tratamento dos animais em modelo de envenenamento experimental com o vBj foram utilizadas as BMDCs maturadas por estímulo do LPS. As células foram injetadas no músculo gastrocnêmio no mesmo local da injúria, em uma única dose, 3h após o envenenamento e o tratamento foi observado em diferentes períodos durante 7 dias. O efeito do tratamento foi comparado com o grupo experimental não tratado (NT) com as BMDCs. No grupo NT foi observado necrose tecidual, influxo leucocitário e hemorragia no local da lesão. Houve aumento da CK-sérico e tecidual e liberação das citocinas IL-6, vii TNF-α e IL-1β nas primeiras horas após o envenenamento. Diferentemente, após o tratamento com as BMDCs o efeito local foi atenuado, sendo o infiltrado inflamatório, necrose de coagulação e hemorragia diminuídos ou inexistente, bem como redução tanto dos níveis de CK-sério e tecidual, quanto na liberação de citocinas e, consequentemente, início de um processo regenerativo moderado. Em conclusão, os resultados do presente estudo mostraram que o vBj afeta a maturação das BMDCs e induz um processo inflamatório no local da lesão. O tratamento com as BMDCs injetadas no músculo foi importante para a redução da lesão muscular e da resposta inflamatória, contribuindo para a restauração precoce do musculo após injeção com o vBj | ||||||||||||||||||||||||
| Abstract | Snakebites are considered a serious public health problem on all continents and, for this reason, in 2017 the World Health Organization (WHO) classified them as a neglected tropical disease, due to the severity and incidence of envenoming. Most bites by venomous snakes cause local and systemic alterations in the skeletal muscle and, in the case of Bothrops jararacussu venom (BjV), these tissue dysfunctions are consequences of edema and necrosis, which in turn, it is considered one of the most myotoxic venoms among Bothrops species. Studies reveal that leukocyte, mainly neutrophils and macrophages, play an important role in the process of tissue regeneration after envenomation by bothropic snakes. Dendritic cells (DCs) also play important roles because they are highly specialized leukocytes in antigen presentation. Another important aspect to be mentioned involving DCs is the activation of these cells in the first phase of muscle injury, along with monocytes, macrophages, and myogenic cells. Thus, the present study evaluated the potential of DCs in reducing tissue damage, as well as in regenerating the gastrocnemius muscle after envenoming. And for that, bone marrow cells from Swiss mice were obtained and the hematopoietic precursors were stimulated to differentiate into DCs (BMDCs) in the presence of GM-CSF and IL-4. The differentiation process was observed for 8 days through the expression of surface molecules MHC-II, CD1d, CD83, CD11c, CD86 and CD80, and the maturation of BMDCs was induced at the end of the culture with the addition of LPS or BjV. The expression of these markers and the release of IL-6, TNF-α and IL-1β at different levels was observed throughout the differentiation process, as well as maturation. However, at the maturation process that is activated by LPS the expression of MCH-II increased. The expression of CD11c and CD80 remained high, with moderate levels of CD83 and CD86 also observed. After incubation with BjV, there was a decrease in the expression of markers CD1d, CD11c, CD83, and CD86. In the treatment of animals in the model of experimental envenoming with BjV, BMDCs matured by LPS stimulation were used. The cells were injected into the gastrocnemius muscle at the same site of the BjV injury, in a single dose, 3h after envenomation, and the treatment was observed at different periods for 7 days. The treatment effect was compared with the untreated (NT) experimental group with the BMDCs. In the NT group, tissue necrosis, leukocyte influx, and hemorrhage at the injury site were observed. There was an increase in serum and tissue CK and release of cytokines IL-6, TNF-α, and IL-1β in the first hours after ix envenomation. In contrast, the results obtained after treatment with BMDCs demonstrated an attenuated local effect with a small leukocyte influx, decreased or non-existent necrosis and hemorrhage, as well as a reduction in both serious and tissue CK levels and cytokine release and, consequently, the onset of a moderate regenerative process. In conclusion, the results of the present study showed that BjV affects the maturation of BMDCs and induce an intense inflammatory process at the site of injury. The treatment of envenoming with BMDCs in the muscle was important for reducing muscle damage and the inflammatory response, contributing to the early onset of the tissue repair process. | ||||||||||||||||||||||||
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